MEM培養基是動物細胞培養中的常用的培養基,主要是貼壁細胞的培養,修改配方后也可用于其他類型細胞培養,例如如無鈣(Ca)MEM培養基可被用于懸浮細胞的培養,而MEM培養基可被用于二倍體細胞的培養。
配方
1.配置前準備:配置培養基新制備的milli water。調節pH值的酸堿溶液也應該使用這種水配置。制備培養基的器皿清洗干凈,并用milli water潤洗兩次。
2.溶解培養基:取5%終體積的milli water,加入到1L玻璃杯中,將干粉培養基倒入燒杯,水洗包裝袋內面兩次,倒入培養液中。磁力攪拌助溶。
3.補加試劑:根據包裝袋說明加入NaHCO3(2.2g),HEPES(2.383,10mmol)、非必需氨基酸(可不加,10ml)。
4.加抗生素:一般抗生素終濃度--青霉素100U/ml,鏈霉素100U/ml。1L加入10m儲備液。
5.調pH值:加水到1000ml,然后用HCL或者NaOH調節pH到7.2。
6.過濾除菌:采用0.22um濾膜。過濾后分裝于小瓶中(100或200ml)。過濾后pH值一般上升0.1-0.3。
7.加小牛血清:根據MEM培養基配置的量將小牛血清分裝,冷凍保存(-20度)。臨用前將加入小牛血清10%。
使用說明
1、保存在2-8度干燥環境,避光。
2、稱量出比終容積小5%的蒸餾水,混合的容器盡可能接近終容積。
3、將干粉加入到室溫15到30度的水中,輕柔攪拌,勿用熱水。
4、沖洗出包裝袋內所有干粉。
5、每升培養基加入2.2g碳酸氫鈉。
6、用水稀釋至終的容積,攪拌直至溶解。不要過分混合。
7、調整pH值比后的培養用的pH值要低0.2到0.3(過濾后pH值一般要升高0.1 到0.3):用1N NaOH 和 1N HCl,邊攪拌邊緩慢添加。調整pH值完畢后,封閉容器,直至過濾。
8、立即用膜濾過消毒。