一、分離方法會影響胰島的產率和存活率:
因此,取材時需要注意
1.胰臟應快速取材,保持包膜完整。
2.建議采用UW溶液運輸。
3.對胰臟進行評估,在消化酶灌注前去除多余的脂肪和殘留的十二指腸和脾臟。
4.消化過程不宜進行震蕩,以保證胰腺組織被灌注的消化酶液消化,而不是被胰腺所釋放的胰蛋白酶消化。
5.要保證胰島的包膜完整,消化不能太充分。寧可不足,也不可過頭,否則會影響胰島純化的產率。
二、分離胰島細胞時的注意事項:
1. biocoll分離液使用時,是采用連續密度梯度,需要分別配制密度為1.065g/mL(UW溶液與Biocoll混合)和密度為1.095 g/mL(UW溶液與Biocoll混合)的溶液,二者再混合。
2. 分離時離心1800rpm,可考慮離心10分鐘,之后使COBE細胞分離機保持4℃,防止酶激活導致結構完整性破壞。
3. 胰島在最輕密度層,隨著密度增加,也會有部分胰島,但外分泌組織也會增多。