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使用細胞分離液的注意事項
  • 發布日期:2023-06-12      瀏覽次數:594
    • 一、分離方法會影響胰島的產率和存活率:

      因此,取材時需要注意

      1.胰臟應快速取材,保持包膜完整。

      2.建議采用UW溶液運輸。

      3.對胰臟進行評估,在消化酶灌注前去除多余的脂肪和殘留的十二指腸和脾臟。

      4.消化過程不宜進行震蕩,以保證胰腺組織被灌注的消化酶液消化,而不是被胰腺所釋放的胰蛋白酶消化。

      5.要保證胰島的包膜完整,消化不能太充分。寧可不足,也不可過頭,否則會影響胰島純化的產率。

       

      二、分離胰島細胞時的注意事項:

      1. biocoll分離液使用時,是采用連續密度梯度,需要分別配制密度為1.065g/mL(UW溶液與Biocoll混合)和密度為1.095 g/mL(UW溶液與Biocoll混合)的溶液,二者再混合。

      2. 分離時離心1800rpm,可考慮離心10分鐘,之后使COBE細胞分離機保持4℃,防止酶激活導致結構完整性破壞。

      3. 胰島在最輕密度層,隨著密度增加,也會有部分胰島,但外分泌組織也會增多。


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