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近期刷屏的XG疫情新聞里，核酸試劑是一個(gè)高頻詞。許多剛開始爆發(fā)疫情的國家的XGBD核酸試劑儲備不足。比如，我國近期向缺乏XGBD核酸試劑的日本國立傳染病研究所（NIID）捐贈了12500套核酸試劑。

而美國匆忙上馬的XGBD核酸試劑卻被證明是一堆廢品。在今年2月12號和26號的新聞發(fā)布會上，美國疾病控制與預(yù)防中心（CDC ）承認(rèn)由于一個(gè)成分出錯(cuò)，*給美國國內(nèi)外的公共衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)室分發(fā)的400份試劑給出了不準(zhǔn)確的測試結(jié)果，是無效的。于是乎，CDC只能重新研發(fā)新的新/冠/肺/炎檢測試劑。在2月26號的新聞發(fā)布會上，美國CDC的發(fā)言人承認(rèn)其開發(fā)的XGBD核酸試劑存在問題，并開始研發(fā)新的試劑。那么，這個(gè)核酸試劑到底是什么怎么難研發(fā)呢？病毒檢測又是怎么做的呢？

實(shí)際上，XGBDSARS-CoV-2的檢測采用的是一種應(yīng)用非常廣泛的核酸檢測手段、被稱為金標(biāo)準(zhǔn)的即時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qPCR）。

RT PCR技術(shù)經(jīng)常被用來檢測HIV病毒、乙肝病毒等病原體。RT PCR 的主要工作原理就是通過只對特定病毒有效的試劑制造大量的病毒核酸鏡像，從而檢測這種病毒是否出現(xiàn)在樣本，比如病人的鼻涕里。

我們先來看看RT PCR的具體過程吧。

首先，先用高溫把病毒的雙鏈DNA拆成2根單鏈，拆開的目的就是為了制造它的鏡像。當(dāng)然，有些病毒（如HIV病毒和新/型/冠/狀病毒）的遺傳物質(zhì)不是DNA，而是RNA，也就是說它只有一條鏈。那么在做的時(shí)候稍微麻煩一點(diǎn)，要先把它變成雙鏈的，然后再拆開來。

引物和單鏈DNA結(jié)合

接著就要開始制造鏡像了。制造的時(shí)候，要先定個(gè)地標(biāo)，然后才能開始作業(yè)。這個(gè)地標(biāo)就是引物，也就是一小段單鏈 DNA，它會和病毒核酸的特定部位，比如某個(gè)基因開頭的地方結(jié)合。

地標(biāo)定好了，就可以開始正式的鏡像復(fù)制黏貼了。復(fù)制的過程，靠的是一種叫做 Taq聚合酶 的蛋白質(zhì)，我們就叫它小T吧。

Taq聚合酶來自生活在溫泉里的海棲熱袍菌

小T賊強(qiáng)賊好用，50攝氏度的高溫都不會熟（變性），因?yàn)樗鼇碜陨钤跍厝蜕詈崛锏?/span>海棲熱袍菌。換別的蛋白質(zhì)，在 PCR 機(jī)器的高溫里烘一會兒就涼了。咦？

Taq聚合酶（黃色）生產(chǎn)擴(kuò)增子（白色）

小T只認(rèn)地標(biāo)，見到地標(biāo)才開工。找到作為地標(biāo)的引物后，小T和溜達(dá)雞似得順著它一路往下走，就復(fù)制出了一段病毒核酸的鏡像，這個(gè)鏡像就叫做擴(kuò)增子。

如果能檢測出擴(kuò)增子，就能證明出現(xiàn)了我們要找的病毒基因。現(xiàn)在問題來了，DNA 和 RNA 那么小，我們怎么知道有沒有產(chǎn)生足夠多的擴(kuò)增子呢？

這時(shí)候就要加入熒光探針，也就是一小段能夠發(fā)出熒光的特殊單鏈 DNA 來檢測了。

熒光探針一端有個(gè)會發(fā)熒光的分子，另一端則會把熒光吃掉。

熒光探針這個(gè)東西很神奇，它的一端有一個(gè)會發(fā)出熒光的分子R（報(bào)告熒光基團(tuán)），另一端有一個(gè)吸收熒光的分子Q（淬滅熒光基團(tuán)）。

R和Q它倆是一對在一起就要吵架的冤家，只要R發(fā)光，Q就會把它的光吸收掉。但是它倆要是分開，R發(fā)出的光就不會被吸收掉，我們就可以看到它亮了。

熒光探針檢測擴(kuò)增子就是利用R和Q分分合合的原理。當(dāng)路標(biāo)，也就是引物和病毒核酸結(jié)合的時(shí)候，探針也會到引物后面的某段特定DNA，比如某個(gè)基因上乖乖躺好

引物（左）和熒光探針（右）可以和病毒單鏈核酸的特定位置結(jié)合

我們剛才說過，小T會沿著引物一邊溜達(dá)一邊修路，制造出病毒核酸的鏡像。不過，小T不僅是修路專家，還是拆彈專家，它會把粘在路上的探針拆散架。

遇到小T后，熒光探針就 BONG 炸了，R和Q就果斷分手了。分手后，重獲自由的R渾身上下開始散發(fā)出單身才有的光彩，就可以被探測儀檢測到了。所以，如果檢測到了熒光，就說明檢測到了目標(biāo)病毒核酸啦。

S型的擴(kuò)增曲線代表檢測出了病毒。如果是平直的擴(kuò)增曲線，則代表沒有檢測出病毒。

這里的路標(biāo)（引物）、修路專家小T、熒光探針，還有一些催化劑就是傳說中的病毒核酸試劑了。在檢測的時(shí)候，只要把病毒樣本和試劑混合，放到 RT PCR 機(jī)器里去跑，就可以得出病人有沒有被病毒感染的結(jié)果了。

檢測不同的病毒需要不同的引物和探針，但是XGBD檢測試劑還沒有統(tǒng)一的引物和探針，尚處于研發(fā)探索階段。

比如，香港大學(xué)的一個(gè)團(tuán)隊(duì)瞄準(zhǔn)的是冠狀病毒大家族下的一支，也就是 Sarbecovirus 亞屬的基因（ORF1b 和 N 基因）。而世界衛(wèi)生組織給159個(gè)實(shí)驗(yàn)室派發(fā)的檢測試劑的檢測目標(biāo)是能夠區(qū)分非典的 SARS-CoV 病毒和XGBD的基因（檢測的是RdRP基因、N基因和E基因）。

國內(nèi)早一批參與病毒試劑生產(chǎn)研發(fā)的上海之江生物生產(chǎn)的試劑盒，該試劑檢測的是冠狀病毒的3個(gè)典型基因（ORF1ab、N基因和E基因）。

需要注意的是，上面只是核酸檢測的理論，實(shí)操其實(shí)更加復(fù)雜，能出錯(cuò)的地方很多。今年2月19日發(fā)表在 Nature Biotechnology 上的一篇文章指出，雖然 PCR 技術(shù)本身很可靠，但是如果操作不當(dāng)，就有可能給出假陰性的結(jié)果。

比如，做檢測的試劑要放在零下20攝氏度的冰箱里，防止試劑中的蛋白質(zhì)分解。

用的時(shí)候，大部分試劑是放在冰上解凍的。但是小T在使用前一直要保持零下20攝氏度的狀態(tài)。另外，熒光探針不能見光，所以要避光儲存。

你看，試劑的作用原理和檢測操作，試劑和病毒樣本的保存條件如此嚴(yán)苛，即使在發(fā)達(dá)國家，也只有少數(shù)實(shí)驗(yàn)室有能力進(jìn)行檢測。 比如在本周二，美國 CDC 的國家免疫與呼吸道疾病中心主任 Nancy Messonnier 表示，目前全美只有12個(gè)檢測部門有能力檢測XGBD。

當(dāng)然，影響核酸檢測結(jié)果的還有試劑以及實(shí)驗(yàn)操作以外的因素。

為新加坡政府制造了XGBD檢測試劑，并且給中國供應(yīng)了1萬份試劑的新加坡生物醫(yī)學(xué)研究與開發(fā)中心啟奧城（BIOPOLIS）的試劑研發(fā)團(tuán)隊(duì)領(lǐng)導(dǎo) Sidney Lee 表示， XGBD核酸試劑測不準(zhǔn)的問題還和病人接受檢測的時(shí)機(jī)以及病毒樣本運(yùn)輸條件有關(guān)。

比如，由于 SARS-CoV-2 主要感染肺部，因此初期患者的咽拭子可能無法截取足夠多的病毒。其次，如果病毒脫離人體太久，或運(yùn)輸儲存條件不當(dāng)，那么病毒核酸可能會分解，這也會降低能夠檢測出來的病毒數(shù)量。

由于病毒核酸試劑檢測結(jié)果不穩(wěn)定等因素，我國在2月8日公布了XG的確診標(biāo)準(zhǔn)，不再只依賴核酸檢測。

而在2月14日，鐘南山領(lǐng)導(dǎo)的呼吸疾病國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室推出了一種擺脫了病毒核酸檢測的新的檢測方法——XGBD IgM 抗體快速檢測試劑盒。

抗體試劑不檢測病毒核酸，而檢測病人體內(nèi)有沒有出現(xiàn)抗體。鐘南山團(tuán)隊(duì)的抗體試劑有望在15分鐘內(nèi)快速篩查XG病人，為挽救更多人的生命爭取寶貴的時(shí)間。另據(jù)《科學(xué)》在2月27號的報(bào)道，新加坡已經(jīng)開始采用杜克-新加坡國立大學(xué)醫(yī)學(xué)院研發(fā)的抗體檢測試劑篩查患者。

在這場大考中，希望我國交卷離開考場，順便給曾經(jīng)的學(xué)霸們遞個(gè)小抄。

本文轉(zhuǎn)載自GZH“把科學(xué)帶回家”（ID：steamfor/k/ids）

撰文：七君