產(chǎn)品時間:2022-07-26
訪問次數(shù):923
Hyclone公司擁有深厚的生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)血清的工業(yè)經(jīng)驗(yàn)。為了獲得高等級參數(shù)指標(biāo)的胎牛血清,Hyclone采用了非常嚴(yán)格的質(zhì)量控制體系。
品牌 | HyClone | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品名稱: | HyClone FetalClone II血清(北美)、HyClone FetalClone II 血清、HyClone美國 FetalClone II血清、海克隆FetalClone II血清(北美)、海克隆FetalClone II血清 |
英文名稱: | HyClone FetalClone II Serum, US origin. HyClone FC II, US origin. |
產(chǎn)品貨號: | SH30066.03 |
血清等級: | Engineered serum products(工程血清) 工程血清產(chǎn)品性價(jià)比高,是胎牛血清的高性能替代品。 |
處理方式: | 3 x 100 nm濾膜過濾 |
地區(qū)來源: | 北美,美國 |
內(nèi)毒素水平: | ≤10 EU/mL |
血紅素水平 | ≤20 mg/dL |
熱滅活 | 未滅活 |
射線處理 | 未處理 |
昆蟲細(xì)胞 | 未檢測 |
病毒和支原體 | 陰性 |
細(xì)菌和真菌 | 陰性 |
產(chǎn)品規(guī)格: | 500 ML |
保存條件: | -5 to -20°C |
運(yùn)輸方式: | 干冰運(yùn)輸 |
產(chǎn)品應(yīng)用: | HyCloneFetalClone II 血清血源來自美國通過美國USDA機(jī)構(gòu)認(rèn)證的牧場, 血源質(zhì)量穩(wěn)定可靠。
HycloneFetalClone II 血清(FetalClone II, US Origin)產(chǎn) 品特點(diǎn)如下: *的產(chǎn)品溯源追蹤,血清中抗體濃度低而生長因子豐富,采用TP技術(shù)保證了瓶與瓶之間的小的差異,通過 了美國農(nóng)業(yè)局USDA認(rèn)證。 海克隆FetalClone II 血清SH30066.03質(zhì)量非常好,用途比較廣 ,適用于各種癌細(xì)胞株,嬌 貴細(xì)胞,原代細(xì)胞,干細(xì)胞(胚胎干細(xì)胞,間充質(zhì)干細(xì)胞等)培養(yǎng)。 |
特級胎牛血清(Defined FBS) | ||
產(chǎn)品描述 | 規(guī)格 | 貨號 |
HyClone胎牛血清(Defined FBS), 美國血源 | 500 mL | SH30070.03 |
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優(yōu)級胎牛血清(Characterized FBS) | ||
產(chǎn)品描述 | 規(guī)格 | 貨號 |
HyClone胎牛血清(Characterized FBS), 美國血源 | 500 mL | SH30071.03 |
HyClone胎牛血清,USDA驗(yàn)證(USDA Tested FBS) | 500 mL | SH30910.03 |
HyClone胎牛血清(Characterized FBS), 加拿大血源 | 500 mL | SH30396.03 |
HyClone胎牛血清(Characterized FBS), 新西蘭血源 | 500 mL | SH30406.02 |
HyClone胎牛血清(Characterized FBS), 澳洲血源 | 500 mL | SH30084.03 |
HyClone胎牛血清(Characterized FBS), 南美血源 | 500 mL | SV30160.03 |
標(biāo)準(zhǔn)級胎牛血清(Standard FBS) | ||
產(chǎn)品描述 | 規(guī)格 | 貨號 |
HyClone胎牛血清(Standard FBS), 美國血源 | 500 mL | SH30088.03 |
特殊用途胎牛血清(Specialty FBS) | ||
產(chǎn)品描述 | 規(guī)格 | 貨號 |
HyClone活性炭處理胎牛血清(Charcoal/Dextran Treated FBS), 美國血源 | 500 mL | SH30068.03 |
HyClone透析型胎牛血清(Dialyzed FBS), 美國血源 | 500 mL | SH30079.03 |
HyClone超低IgG胎牛血清(Super Low IgG FBS), 美國血源 | 500 mL | SH30898.03 |
胎牛血清(Screened FBS) | ||
產(chǎn)品描述 | 規(guī)格 | 貨號 |
HyClone ES細(xì)胞胎牛血清(ES Cell Screened FBS), 美國血源 | 500 mL | SH30070.03E |
HyClone人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞胎牛血清(Human Mesenchymal Stem Cell Screened FBS),美國血源 | 500 mL | SH30070.03M |
HyClone四環(huán)素陰性胎牛血清(Tetracycline Screened FBS), 美國血源 | 500 mL | SH30070.03T |
HyClone昆蟲細(xì)胞胎牛血清(Insect Cell Screened FBS), 美國血源 | 500 mL | SH30070.03I |
小牛血清(Bovine Calf Sera) | ||
產(chǎn)品描述 | 規(guī)格 | 貨號 |
HyClone小牛血清(Bovine Calf Serum), 美國血源 | 500 mL | SH30073.03 |
HyClone補(bǔ)充鐵離子小牛血清(Iron-Supplemented Bovine Calf Serum),美國血源 | 500 mL | SH30072.03 |
HyClone新生牛血清(Newborn Calf Serum), 美國血源 | 500 mL | SH30118.03 |
新西蘭新生牛血清(New Zealand Newborn Bovine Calf Serum) | 500 mL | SH30401.01 |
HyClone新西蘭補(bǔ)充鐵離子小牛血清 (New Zealand Iron Supplemented Newborn Serum) | 500 mL | SH30626.02 |
工程血清(Engineered sera) | ||
產(chǎn)品描述 | 規(guī)格 | 貨號 |
HyClone阿爾法牛血清(Alpha Calf Fraction), 美國血源 | 500 mL | SH30212.03 |
HyClone FetalClone I 血清(FetalClone I),美國血源 | 500 mL | SH30080.03 |
HyClone FetalClone II 血清(FetalClone II),美國血源 | 500 mL | SH30066.03 |
HyClone FetalClone III 血清(FetalClone III),美國血源 | 500 mL | SH30109.03 |
更多種類牛血清(Alternatives) | ||
產(chǎn)品描述 | 規(guī)格 | 貨號 |
HyClone促生長型小牛血清(Bovine Growth Serum), 美國血源 | 500 mL | SH30541.03 |
HyClone加強(qiáng)型小牛血清(Cosmic Calf Serum), 美國血源 | 500 mL | SH30087.03 |
HyClone新西蘭加強(qiáng)型新生牛血清(New Zealand Cosmic Calf Serum) | 500 mL | SH30413.02 |
物種特異性血清(Species-specific sera) | ||
產(chǎn)品描述 | 規(guī)格 | 貨號 |
HyClone供體成年牛血清(Donor Adult Bovine Serum), 美國血源 | 500 mL | SH30075.03 |
HyClone供體馬血清(Donor Equine Serum,Donor Horse Serum), 美國血源 | 500 mL | SH30074.03 |
HyClone新西蘭豬血清(New Zealand Porcine Serum) | 1000 mL | SH30908.04 |
細(xì)胞培養(yǎng)基(Media) | ||
產(chǎn)品描述 | 規(guī)格 | 貨號 |
RPMI 1640 Medium | 500 mL | SH30255 |
DMEM | 500 mL | SH30243 |
DMEM | 500 mL | SH30022 |
DMEM | 500 mL | SH30081 |
DMEM | 500 mL | SH30003 |
IMDM | 500 mL | SH30228 |
MEM | 500 mL | SH30024 |
HyQTase | 100 mL | SV30030 |
Trypan Blue Solution(臺盼藍(lán)染色液) | 100 mL | SV30084 |
Gentamicin Solution(慶大霉素溶液) | 10 x 10 mL | SV30080 |
Antibiotic Antimycotic Solution(抗生素抗真菌液) | 100 mL | SV30079 |
Phosphate Buffered Saline (PBS,磷酸鹽緩沖液) | 500 mL | SH30256 |
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (DPBS) | 500 mL | SH30264 |
HEPES | 100 mL | SH30237 |
Earle’s Balanced Salt Solution (EBSS溶液) | 500 mL | SH30029 |
Hank’s Balanced Salt Solution (HBSS溶液) | 500 mL | SH30030 |
L-Glutamine | 500 mL | SH30034 |
NEAA | 100 mL | SH30238 |
Cell Culture Grade Water | 500 mL | SH30529 |
Hyclone是美國GE公司的細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品的品牌。Hyclone胎牛血清(Foetal bovine serun,F(xiàn)BS)原料是來源于澳大利亞,美國,加拿大和南美洲的高質(zhì)量血源,即Hyclone胎牛血清南美,Hyclone胎牛血清澳洲,Hyclone胎牛血清北美。Hyclone公司擁有深厚的生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)血清的工業(yè)經(jīng)驗(yàn)。為了獲得高等級參數(shù)指標(biāo)的胎牛血清,Hyclone采用了非常嚴(yán)格的質(zhì)量控制體系。
Hyclone公司的胎牛血清,目前在國內(nèi)很多高校、科研院所、研發(fā)公司的細(xì)胞培養(yǎng)過程中獲得了非常廣泛的使用,產(chǎn)品質(zhì)量也贏得了大家的良好口碑。
Hyclone胎牛血清使用方法
在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,經(jīng)常加入5%-20%的Hyclone胎牛血清澳洲,常使用的Hyclone澳洲胎牛血清濃度是10%。高濃度的血清可能改變細(xì)胞的基因表達(dá)譜,影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,我們在實(shí)驗(yàn)中使用10%的Hyclone澳洲胎牛血清培養(yǎng)293T細(xì)胞,效果非常好。但是有些細(xì)胞也會使用5%的Hyclone FBS或者20%的Hyclone胎牛血清,要根據(jù)具體細(xì)胞選擇合適的胎牛血清濃度。
1、需要長期保存的血清必須儲存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會被破壞,而影響血清質(zhì)量。如果一次無法用完一瓶,可將40~45ml分裝于無菌50ml離心管中。由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。
2、一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)Hyclone牛血清有懸浮物,則可將Hyclone牛血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接過濾Hyclone牛血清。
3、瓶裝Hyclone胎牛血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40~45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。.切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。
4、熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已*解凍的血清.加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體成分滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因?yàn)闊崽幚頃斐裳宄恋砦镲@著增多,而且還會影響血清的質(zhì)量.補(bǔ)體參與反應(yīng)有:細(xì)胞毒作用, 平滑肌細(xì)胞收縮, 肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺, 增強(qiáng)吞噬作用, 促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化。
5、血清(例如:Hyclone南美血清)中的沉淀物絮狀物:主要是Hyclone牛血清中的脂蛋白變性及解凍后Hyclone牛血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質(zhì)量.可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理。 顯微鏡下"小黑點(diǎn)":經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物的形成會顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點(diǎn)",常誤認(rèn)為血清受污染。一般情況下,此小黑點(diǎn)不會影響細(xì)胞生長,但如果懷疑血清(例如:Hyclone南美血清)質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號的血清。
一、HyClone胎牛血清滅活問題。
1、問:加到培養(yǎng)基中的HyClone胎牛血清必須滅活嗎?
答:不是必須的,看做什么實(shí)驗(yàn)了。
2、問:Hyclone胎牛血清滅活是56℃ 30分鐘嗎?
答:如果用于培養(yǎng)大多數(shù)的腫瘤細(xì)胞,血清一般是不需要滅活的,這樣可以有效保存血清中的生長因子。但是如果用于培養(yǎng)一些表面具有補(bǔ)體受體的細(xì)胞,如內(nèi)皮細(xì)胞,血清是需要滅活,一般是56℃,30min。
3、問:我要做滋養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng),Hyclone血清要滅活嗎?
答:進(jìn)口的一般都已滅活,國產(chǎn)的不一定,還是滅活一下再用較安全。
4、問:我用病毒上清轉(zhuǎn)染細(xì)胞,培養(yǎng)用的Hyclone牛血清需要滅活嗎?因?yàn)檠逯锌赡苡行┭a(bǔ)體和抗體,是不是會影響轉(zhuǎn)染?我想未滅活的血清中含些抗體補(bǔ)體可能會和病毒相結(jié)合,影響轉(zhuǎn)染,正確嗎?細(xì)胞是單核細(xì)胞白血病細(xì)胞,病毒是病毒包裝細(xì)胞PT67收集的病毒上清。為什么要用無血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時,目的是什么?
答:血清一定要滅活,可以先用無血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時以后再加血清。避免雜蛋白對病毒和宿主結(jié)合過程的干擾,一般是2-6小時,根據(jù)細(xì)胞的狀態(tài)決定。血清不一定需要滅活,滅活的目的是將血清中的補(bǔ)體滅活!這要根據(jù)實(shí)際情況而定,如果沒有把握那就滅活吧,也不麻煩56度半個小時。
5、問:(1)我買的是Hyclone胎牛血清澳洲,要滅活嗎?有些說法是需要,有些說直接解凍后就可以加入到培養(yǎng)基中;我配制胰蛋白酶液,用的是D-PBS,有關(guān)系嗎?
答:關(guān)于血清的熱滅活,是很多人感興趣也存在一定爭議的話題。大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室將血清的熱滅活還是作為常規(guī)來執(zhí)行,因?yàn)橛袃蓚€作用,一是滅活補(bǔ)體,第二是滅活血清中可能存在的支原體。但是實(shí)驗(yàn)者并沒有考慮熱處理對血清中的生長因子、氨基酸等成分帶來的負(fù)面影響。
我在實(shí)驗(yàn)室處理Hyclone南美血清的時候,有一次水浴箱在滅活過程中出現(xiàn)故障,溫度升高到80℃,血清變成了凝膠狀,我重新處理了另外一份血清,將兩份血清對比,發(fā)現(xiàn)高溫直接影響到血清所含的抗體蛋白。在56℃下滅活半小時以上,肯定也會對里面的蛋白起到破壞作用。下次有機(jī)會我做個延長滅活時間的實(shí)驗(yàn)試試,看看到底有多大的影響。熱滅活之后,血清放在四度冰箱久了,就會有沉淀產(chǎn)生,這常常會被認(rèn)為是微生物污染或者是黑膠蟲污染。為了驗(yàn)證到底有沒有污染,常常又會把血清放置37℃溫育,但是血清中的蛋白會進(jìn)一步析出,后還是要做鏡檢,無菌培養(yǎng)試驗(yàn),和革蘭氏染色試驗(yàn),非常麻煩。
我看過一份資料,里面提到70%的實(shí)驗(yàn)者認(rèn)為滅活是理所當(dāng)然的。常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間,而時間則從15分鐘到60分鐘不等。其中常用的手法是56℃熱處理30分鐘。隨著血清采集、處理、加工工藝的提高,許多早先認(rèn)為是熱滅活的原因已經(jīng)不再成立,只有少數(shù)對血清進(jìn)行熱滅活的研究者在實(shí)驗(yàn)中證實(shí)了這一步驟的有效性和必要性。有人比較過11個不同細(xì)胞株,發(fā)現(xiàn)其中熱滅活對6 個細(xì)胞株(HBAE,MDBK,Vero,成纖維細(xì)胞,MRC-5)的生長帶來負(fù)面影響,三個細(xì)胞株(FOX-NY,MDCK和CHO-K1)不受熱滅活的影響,而只有兩個細(xì)胞株(Balb/3T3,Sp2/0Ag14 hybrid),在熱滅活之后,細(xì)胞生長有輕微的改善。所以,在正常的操作下,熱滅活通常對細(xì)胞的生長沒有明顯的促進(jìn)作用。
你可以摸索一下,Hyclone澳洲SH30084.03血清從-20℃冰箱拿出來之后在常溫解凍,然后混勻分裝成兩份,一份滅活,一份不滅活,比較這兩種血清對細(xì)胞是否有影響。然后再確定是滅活還是不滅活。這個過程多也就一個星期。同時你還要考慮血清滅活與否對你后續(xù)的實(shí)驗(yàn)有沒有影響。
問:(2)分裝后的HyClone胎牛血清澳洲從-20℃取出放4℃讓其液化,卻見血清比較混濁,有沉淀產(chǎn)生,這屬正常嗎?
答:正常。
二、血清的保存問題。
1、問:2016年6月到期的Hyclone北美胎牛血清到2017年5月還能用嗎?
答:只有試試了,如果一直在-20℃凍著來者,應(yīng)該還可以,先少用點(diǎn)看看。養(yǎng)細(xì)胞系應(yīng)該沒問題,原代不行。
2、問:請問我自然溶化好的Hyclone北美血清和1640培養(yǎng)基今天用不上,明天用,我不想放到冰箱里,放在室溫下一晚行嗎?100毫升培養(yǎng)瓶加多少培養(yǎng)基呢?
答:可以放4℃。4-5ml。
3、問:4℃冰箱內(nèi)保存3個月的HyClone胎牛血清(南美),能否繼續(xù)使用?相關(guān)細(xì)胞和其它試劑的代價(jià)比較高,不敢輕易嘗試。
答:需要長期保存的Hyclone胎牛血清澳洲必須要保存在-20至-70℃的低溫冰箱中,4℃冰箱中保存時間不要超過1個月。
三、Hyclone澳洲血清滅活時溫度問題。
1、問:因?yàn)閷?shí)驗(yàn)室水浴鍋失控,Hyclone澳洲血清SH30084.03滅活時,溫度到了61.7℃,這血清還能用嗎?
答:多長時間啊?短時間應(yīng)該可以吧,我有一次加熱了一個多小時,還照樣用。
2、問:我滅活Hyclone胎牛血清時,用的電磁爐,定在了70℃,本來說調(diào)溫度到56℃再放血清的,后來忘了,就把血清放進(jìn)去了,所以滅活的溫度肯定超過56℃了,不知道這樣對血清有沒有影響?
答:常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間,而時間則從15分鐘到60分鐘不等,其中常用的手法是56℃熱處理30分鐘。看看你養(yǎng)的細(xì)胞是什么,一般的話估計(jì)問題不大,要是很珍貴的細(xì)胞還是慎重一點(diǎn)啊。熱滅活目的是為了去除血清中補(bǔ)體等對熱敏感的物質(zhì), 在對補(bǔ)體滅活以外,熱處理同時也對血清中可能存在的支原體具有滅活作用。現(xiàn)在好像不主張熱滅活,熱滅活經(jīng)常給血清產(chǎn)品帶來負(fù)面影響,對血清的加熱經(jīng)常導(dǎo)致血清中沉淀的產(chǎn)生,此外,有研究結(jié)果證實(shí)熱滅活步驟減弱了胎牛血清(例如Hyclone北美血清SH30071.03)和小牛血清對細(xì)胞的促粘附作用。
四、FBS可否代替人AB型血清?
問:我現(xiàn)在在做人的外周血b淋巴細(xì)胞的培養(yǎng),文獻(xiàn)上要求用人的AB型血清,但是我覺得很多代理商都沒有。我想FBS代替,但不知道可否,我先是擔(dān)心免疫排斥之類,但是我查了些資料后,應(yīng)該不會(我覺得)。但是我又不能夠TRY。因?yàn)榧?xì)胞因子確實(shí)太貴了,所以咨詢一下。謝謝!
答:你照文獻(xiàn)的做。除非你系列實(shí)驗(yàn)證明你用代用品的結(jié)果與文獻(xiàn)的相同(你還是要用到文獻(xiàn)的試劑)。細(xì)胞培養(yǎng)的影響因素很多,特別是培養(yǎng)基的成分。
五、血清的制備方法問題。
1、問:我的實(shí)驗(yàn)需要自己制備一些血清用于培養(yǎng)細(xì)胞,有沒有人知道用于培養(yǎng)細(xì)胞的血清需要怎樣的制備過程?
答:自己制備血清當(dāng)心污染啊,直接購買Hyclone血清(Hyclone牛血清),例如Hyclone澳洲血清SH30084.03,效果好,質(zhì)量穩(wěn)定!如果無菌條件好的話,用靜置析出方法就行。
2、問:一般我們用得Hyclone胎牛血清用前還要滅活,我想用大鼠的血清,不知道要不要滅活?
答:你直接把采來的血液在離心管里4℃過夜,離心,取上清,在無菌過濾,也可滅活,然后分裝凍存,用時再配。
3、問:如果滅活會不會對Hyclone血清中的一些因子有損傷?
答:加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在進(jìn)行免疫學(xué)研究、培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時,推薦使用熱滅活血清。滅活一般不會對血清中的一些因子損傷的。
六、心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)時HyClone胎牛血清的使用問題。
1、問:在進(jìn)行心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)時,需要用含血清的培養(yǎng)基中止胰酶的消化作用,我現(xiàn)在使用的是含血清10%的培養(yǎng)液,但近日看北醫(yī)一個細(xì)胞培養(yǎng)的課件發(fā)現(xiàn),有用1%血清培養(yǎng)液進(jìn)行中止消化的,想問一下,1%的是否可以,效果是否有保證?這樣確實(shí)能節(jié)省不少血清的。
答:關(guān)于心肌細(xì)胞元代培養(yǎng)的FBS問題:
(1)1%的Hyclone血清*培養(yǎng)基可不可以,得看你胰酶的用量。但是在心肌細(xì)胞元代培養(yǎng)就不行。 10%的FBS*培養(yǎng)基效果都不太好,開始心肌細(xì)胞元代培養(yǎng)需要高濃度的FBS,20%左右,但這就有出現(xiàn)另一個問題,在FBS*培養(yǎng)基中,成纖維細(xì)胞呈優(yōu)勢細(xì)胞,須得在培養(yǎng)基加入適量的BrdU以抑制其生長,純化心肌細(xì)胞。
(2)FBS的作用不僅僅是拿來中和胰酶,只是FBS中的一些蛋白質(zhì)如α-巨球蛋白等有抑制胰酶活性作用。
(3)元代心肌細(xì)胞培養(yǎng)的FBS使用,有講究:剛開始使用20%左右的高濃度的FBS,后逐漸遞減為無血清的DMEM/F-12培養(yǎng)基培養(yǎng)。
2、問:我胰酶的用量是0.08% ,并混和了0.08%的膠原酶。FBS要高濃度遞減是否是說的在細(xì)胞培養(yǎng)中啊,難道在消化時終止也需要如此高的濃度嗎,還有,我的BRDU只用到48小時就不用了,因?yàn)閾?dān)心其損傷太大,可以持續(xù)用多久呢?
答:我用10%FBS終止的,然后差速1h,然后還是用10%FBS的HG-dmem養(yǎng)的,沒有用brdu,心肌細(xì)胞還是比較多和穩(wěn)定的,我第3天就可以用,第2天晚上看就會有搏動。
七、血清和培養(yǎng)基的種類及品牌問題。
1、問:細(xì)胞培養(yǎng)的Hyclone胎牛血清用哪個公司的產(chǎn)品比較好呢?周圍有人用PAA或HyClone胎牛血清,這兩種跟Gibco或sigma出品的差別大嗎?
答:如果是長得非常快得細(xì)胞如pa317,293,c6等惡性腫瘤細(xì)胞,一般得國產(chǎn)血清就可以,如果是原代培養(yǎng)的細(xì)胞,應(yīng)用胎牛血清或類標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,Hyclone公司血清的質(zhì)量不如Gibco(同類血清)。國產(chǎn)的杭州四季青和甘肅民海(中美和資)不錯。有些細(xì)胞(如:sf9,293還有其他一些元代細(xì)胞),用Hyclone的比其他兩種好很多,會大大加速試驗(yàn)進(jìn)度。對于其他一些細(xì)胞(如:vero,MDCK,pk)四季青,Hyclone的小牛血清足矣!另外,Hyclone的還要看產(chǎn)地,常用的Hyclone胎牛血清有Hyclone南美胎牛血清SV30087.02、Hyclone北美胎牛血清SH30071.03、Hyclone澳洲胎牛血清SH30084.03。
2、問:近公司要訂一瓶Hyclone胎牛血清澳洲,實(shí)驗(yàn)室之前都在用小牛血清,沒有買過胎牛血清。請問哪個進(jìn)口公司的好一些?問過試劑公司和進(jìn)口公司,有兩種:一種是PAA的(分普通級和優(yōu)級),一種是Hyclone的(只有普通級,而且是新西蘭產(chǎn)的)。試劑公司推薦使用PAA優(yōu)級的,但看好多文獻(xiàn)都用Hyclone的,公司說是因?yàn)楝F(xiàn)在Hyclone的都不是美國進(jìn)口的了。請問用的哪種胎牛血清比較好?
答:民海的效果還不錯,要是不放心國產(chǎn)的,那就買進(jìn)口的。進(jìn)口的好多公司都有,新西蘭產(chǎn)的效果一般。Hyclone和Hyclone的都還可以。民海的似乎比四季青的要好些。復(fù)蒙的感覺也不錯。
3、問:四季青“無噬菌體、低內(nèi)毒素胎牛血清”與“無支原體胎牛血清”的區(qū)別?培養(yǎng)腫瘤傳代細(xì)胞用哪一個比較好些?
答:用無支原體胎牛血清就可以啦。
4、問:SKBR-3細(xì)胞培養(yǎng)用哪種型號的1640培養(yǎng)基及胎牛血清?
答:我一直用Hyclone的1640,你可以買含HEPES的1*10L的包裝,胎牛血清也是用的Hyclone,10%就行。
八、Hyclone牛血清污染噬菌體的問題。
1、問:有誰知道小牛血清制造過程中怎樣能夠避免噬菌體的污染,以及對已污染噬菌體的牛血清怎樣能夠除去噬菌體?
2、問:我也想知道,我用的血清中大部分都有噬菌體,它對細(xì)胞培養(yǎng)到底有什么影響?
答:不知道您使用的是什么胎牛血清,我們使用的Hyclone胎牛血清,具體是Hyclone澳洲血清SH30084.03,質(zhì)量還算比較穩(wěn)定,不含有噬菌體。
九、培養(yǎng)基HyClone胎牛血清濃度問題。
問:在1640里加Hyclone血清時加多了,90ml里加了20ml Hyclone澳洲血清SH30084.03,約為18%,以前都是加10ml的,查了網(wǎng)上多建議用10%-15%,有關(guān)系嗎?
答:我認(rèn)為一般來說Hyclone牛血清濃度的較大波動對細(xì)胞的狀態(tài)影響較大,建議再加90ml1640調(diào)成10%。血清濃度大當(dāng)然細(xì)胞狀態(tài)感覺要好,但是高濃度的血清可能改變細(xì)胞的基因表達(dá)譜,影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。10%的濃度培養(yǎng)鼻煙癌細(xì)胞很好。
十、問:MTT加藥的時候加不加血清?加藥時要用無血清的培養(yǎng)基嗎?
答:我的藥就是用含Hyclone牛血清的培養(yǎng)基稀釋的,不含血清的培養(yǎng)基對細(xì)胞有毒性或抑制作用,無形中對細(xì)胞造了一個serum-free的模型,細(xì)胞在提內(nèi)本來就是有血清供應(yīng),如果該藥物都不能對抗,那該藥物就沒有什么臨床價(jià)值了,這是我的理解。
十一、PC12細(xì)胞培養(yǎng)所用血清問題。
問:我正準(zhǔn)備購買上海細(xì)胞所的未分化的PC12細(xì)胞,需要滅活的馬血清,可現(xiàn)在買血清很困難,好像是海關(guān)有封鎖,代理商這么說的,我原定購買的Hyclone的horse surum,現(xiàn)在無法買到了,好容易找到一個目前可以進(jìn)血清的公司Hyclone,有一種Donor Equine serum是馬血清嗎?
答:Hyclone的Donor Equine serum可以用,我以前用的就是這個。我當(dāng)時買的,100ml大概140元,具體不記得了。當(dāng)時是看它比別的進(jìn)口的馬血清便宜。另外:我買了以后滅活的。
十二、AB血清的制備問題。
問:本人想從人的外周血中分離AB血清的,用于B淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)。謝謝大家給點(diǎn)建議。人的血,來之不易啊。
答:是AB血型人的血清嗎?這種血清即沒有抗A型抗原抗體,也沒有抗B型抗原抗體。分離血清時將采集的血液注入試管中,待血液凝固后離心分離血清。可將采集的血液放在37℃水浴箱中促進(jìn)血液凝固,減少凝固時間。離心可在2500~3000rpm,10min,足可以分離血清。分離后將血清吸出保存即可。分離血清的量可按采集血液的50%左右計(jì)算,因?yàn)榧t細(xì)胞占總血液的50%左右。當(dāng)然整個過程要注意無菌操作。
十三、HyClone胎牛血清內(nèi)是否含糖?
問:我想做糖誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的試驗(yàn)。細(xì)胞培養(yǎng)液里加入了20%的胎牛血清。因此胎牛血清里是否含有糖對我實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)液糖終濃度影響比較大。今天打電話問Hyclone公司的技術(shù)顧問,回答我糖濃度少于5μg/ml,因此基本可認(rèn)為是不含糖。但我今天把胎牛血清送到我們醫(yī)院檢液科,結(jié)果卻是:6.2mmmol/l(葡萄糖氧化酶法)。難道是檢測人血清的血糖濃度的方法不能用于檢查牛血清嗎?(另起茶水驗(yàn)?zāi)蚴录?檢驗(yàn)科沒有給我回答。
答:應(yīng)該是不含糖的。
十四、血清或培養(yǎng)基產(chǎn)生了顏色或沉淀的問題:
1、問:我用的是海克隆胎牛血清,56℃30分鐘滅活后出現(xiàn)了白色少量絮狀沉淀,是不是污染?還能不能再用?血清的生產(chǎn)日期是2006年7月(現(xiàn)在是2007年6月11日)。
答:應(yīng)該問題不大。你可以取少量Hyclone血清放入培養(yǎng)皿中,37℃過夜培養(yǎng)看看就知道是否污染了。血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,但普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血渭解凍后,也會存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質(zhì)量。若您欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。
2、問:我用MTT法測細(xì)胞的增殖,用DMSO裂解細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)把DMSO加入到孔中就會形成乳白色(用的含胎牛血清的1640培養(yǎng)基,由于沒有離板子的離心機(jī),所以沒有去除培養(yǎng)基直接加的DMSO)。以前用含小牛血清的培養(yǎng)基沒有看到有這種情況。該怎么解決?
答:為什么要用離心機(jī)離心呢?難倒你養(yǎng)的是懸浮細(xì)胞嗎?如果是貼壁細(xì)胞的話直接將MTT倒掉,再加DMSO即可,我們就是這么做的,效果很好!并且測細(xì)胞的增殖的話如果不去掉MTT就加DMSO的話誤差應(yīng)該很大!有時不一定就是血清的原因,可能跟你的MTT放置的時間或以及其他成分有關(guān)!
3、問:(1)Hyclone胎牛血清500ml,今天解凍后沒有混勻直接分裝,結(jié)果使得前面的幾管是清亮的,后面就帶有棕色的,不知有沒有影響?估計(jì)有什么影響?前面的成分好還是棕色的成分好啊?
答:肯定有。還是重新混合重新分裝,我覺得有效成分會集中在棕顏色部分。
問:(2)為什么會出現(xiàn)棕色呢?
答:血清中的棕色多一些可能是因?yàn)榧t蛋白的含量高些的緣故吧。
問:(3)Hyclone血清滅活之后可以存放嗎?我的是前天滅活的,但是沒有加到培養(yǎng)基里,而是放在冰箱里,那下次可以直接用嗎?還是再次滅活啊?
答:當(dāng)然可以,如果多的話,分裝后放在-20℃,下次用時再解凍,也不用再滅活。用一管拿一管,少許血清可以放在4℃。分裝時還要注意不要裝得太滿,以免溢出污染。
十五、污染和過濾的問題。
1、問:懷疑使用中的Hyclone胎牛血清染菌,想用濾膜過濾一下,可否自己用0.22μm濾膜過濾?對血清性質(zhì)有多大影響?有做過的么?
答:可以過濾的,Hyclone血清當(dāng)出廠時都是0.22μm或0.1μm過濾除菌。想證明有沒有染菌不用過濾這么麻煩,只要放置于37℃過夜就可以了,如果有微生物污染會變渾濁的,如果還是澄清的就說明沒有問題的。實(shí)驗(yàn)室中血清很難直接過濾,一般要加到培養(yǎng)基中再過濾。我們實(shí)驗(yàn)室制備培養(yǎng)基時,都使用濾膜過濾,一般而言如果制備1-2瓶培養(yǎng)基,一個濾膜及一支30ml注射器可以過濾50ml小牛血清。如果大量制備培養(yǎng)基也可以將血清加到培養(yǎng)基中,使用0.22微米的大濾膜一起過濾。
2、問:我懷疑我用的*1640培養(yǎng)液被污染了,準(zhǔn)備重新過濾消毒,過濾后是否需要補(bǔ)充胎牛血清?如需又如何補(bǔ)充?
答:*1640培養(yǎng)液被污染了,如果是支原體的話,過濾沒有作用,支原體可以通過濾膜。我們用1640液,都是配液后保留500ml,然后其他的分裝100-200ml,現(xiàn)用現(xiàn)配因?yàn)檠灞?640要貴,如果你想過濾的話,建議你加原比例血清,因?yàn)檠宀粫苋菀淄ㄟ^濾膜。主要的還是找到可能污染的原因。
3、問:加好了血清雙抗的培養(yǎng)基由于污染了再過濾后還能用嗎?
答:建議不要用了。在加了雙抗的情況下已經(jīng)污染,那么細(xì)菌污染的可能性會較小了。一般的過濾除不能去除病毒或者部分真菌的污染的。
4、問:我準(zhǔn)備把使用的*1640培養(yǎng)液重新過濾一遍,不知道培養(yǎng)液中的血清成分是否能通過濾膜,過濾后是否還需要補(bǔ)充胎牛血清?如需又如何補(bǔ)充?
答:可以透過,但是隨著液體量的增多會很慢,如果不加壓會比較麻煩,還有用低蛋白吸附的,不然損失是比較大的。
十六、問:懸浮細(xì)胞培養(yǎng)時能否加Hyclone澳洲血清SH30084.03?如果加了會有什么結(jié)果?為什么懸浮細(xì)胞培養(yǎng)時就不能加血清?
答:血清是細(xì)胞培養(yǎng)基中重要的培養(yǎng)成份之一,對細(xì)胞生長有廣泛影響。在細(xì)胞培養(yǎng)時,我們通常會加入10%的Hyclone胎牛血清。血清的質(zhì)量對細(xì)胞培養(yǎng)的成功至關(guān)重要。一般說來,牛血清包括以下成分:生長因子(如激素,白細(xì)胞介素等),他們可以促進(jìn)細(xì)胞生長;貼附因子,他們可以促進(jìn)細(xì)胞的貼壁,往往只有細(xì)胞貼壁才能增值(懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞除外);蛋白質(zhì)(如血清白蛋白,球蛋白等),既可以作為營養(yǎng)物質(zhì),又可以中止胰酶的作用;還有很多成分不明的物質(zhì)。血清還可以起到解毒作用,如脂肪酸、重金屬和某些蛋白酶的毒性。血清還可以是細(xì)胞免受機(jī)械損傷。因此,無論是貼壁細(xì)胞還是懸浮細(xì)胞,血清是*的。除非因?qū)嶒?yàn)要求無血清培養(yǎng)時,例如:為使細(xì)胞同步化時,我們會采用無血清培養(yǎng)的。單純的說懸浮細(xì)胞培養(yǎng)不能加Hyclone血清就沒有太多的道理了。
十七、關(guān)于中和消化液需要的血清量。
問:用胰蛋白酶消化細(xì)胞后,需要用血清中和。具體這種中和作用所要求的胰蛋白酶和血清之間的比例是多少?
答:做了很久的試驗(yàn),真的沒有想過胰酶和血清的對應(yīng)關(guān)系。不過細(xì)想下來,這個應(yīng)該也沒有固定的比值。血清的品種都是不同的,成分必然有差異,如何能確定其與胰酶的比值關(guān)系?我們消化細(xì)胞的時候,如果是傳代,細(xì)胞變形后,吸出胰酶直接加入適量的hanks液或者全培,這個量看自己的喜好和吹打細(xì)胞方便而定。一般都可以中止消化的。不會存在繼續(xù)消化的事情。如果是從組織上消化細(xì)胞做原代培養(yǎng),我一般都使用全培進(jìn)行中止,而且加的很多,0.25%的胰酶,用10%血清,按1:2的比例應(yīng)該是足夠的。當(dāng)然全培是2,一般我養(yǎng)細(xì)胞的時候,會用國產(chǎn)的比較便宜的血清配制全培,專門用于中止消化,這樣有幾個好處:一是中止消化的效果應(yīng)該好于hanks液吧,再是也有利于維持細(xì)胞活性。而且這部分液體會被離心去掉,血清便宜,離心掉了不會心疼。而養(yǎng)細(xì)胞的時候用好血清。個人觀點(diǎn),僅供參考。
十八、HyClone胎牛血清澳洲中的懸浮物問題。
1、問:發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)的細(xì)胞瓶中背景有許多的小黑點(diǎn),培養(yǎng)液中也有一些漂浮的物。看了之前的帖以為是膠原蟲。本打算換液,換液前特意看了下前些天配的培養(yǎng)液,肉眼發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液中有懸浮的顆粒狀物質(zhì)(不多),于是放在鏡下觀察,新鮮培養(yǎng)液中有一些懸浮的小顆粒,不多。(培養(yǎng)液是R1640+20%牛血清+1%雙抗)于是又將分裝在4℃保存的小牛血清拿出觀察,肉眼可見5、6個白色小小球狀的物質(zhì),在血清瓶稍靠下的部位懸浮。鏡下觀察,也有少量的不知什么物質(zhì)的東西漂浮。小牛血清是Hyclone新西蘭的,標(biāo)簽上寫已經(jīng)經(jīng)過2μm濾膜過濾處理。根據(jù)上述培養(yǎng)液的情況,是否說明培養(yǎng)液已被污染?如果是正常的血清是不是在鏡下不應(yīng)該看到雜物,哪怕是極少量的?根據(jù)上述血清的描述,是不是說明血清也存在問題,還能用嗎?補(bǔ)充:細(xì)胞培養(yǎng)以來生長狀態(tài)就不好。買血清的時候廠家說明不用滅活,所以未滅活。
答:(1)血清應(yīng)該-20℃保存,解凍血清時,請按照的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。
(2)血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,但普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白在血清解凍后,也會存在于血清中,亦可造成沉淀物。
(3)若您一次無法用完一瓶,建議您無菌分裝血清,再放回冷凍,若存放于4℃時,請勿超過一個月,儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白,可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。
(4)解凍HyClone胎牛血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
(5)排出了血清的原因,在考慮實(shí)驗(yàn)用品和無菌操作的問題。
(6)細(xì)菌病毒、衣原體、黑膠蟲污染也很常見,如果細(xì)胞死的太多,影響較大建議更換培養(yǎng)液。
2、問:今天在配培養(yǎng)液時,發(fā)現(xiàn)HyClone胎牛血清北美里面有小碎片樣的漂浮物,血清仍然清亮,不渾濁。不知道是什么,問了實(shí)驗(yàn)室的學(xué)長,說仍然可以用,但還是不放心,沒有用血清。求助園子的各位達(dá)人,這可能是血清出了什么問題?我的血清用了一個月不到,四季青的。
答:可能的原因:(1)培養(yǎng)液配置時Votex不夠,當(dāng)時是清亮的,但過一段時間會析出來;(2)真菌污染。
十九、更換無血清培養(yǎng)基后細(xì)胞大量死亡的問題。
問:我使用Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞,在轉(zhuǎn)染前要換上無血清的培養(yǎng)基。本來?xiàng)l件模的好好的,轉(zhuǎn)染效率也可以接受。但是寒假一回來就發(fā)生了怪事:細(xì)胞在有血清的培養(yǎng)基中長的好好的,一換無血清的培養(yǎng)基就死亡。大概4個小時就能看到較多的細(xì)胞飄起來。但是原來我換無血清培養(yǎng)基,就算放那里10個小時都是沒問題的啊。已經(jīng)換了不同批次的培養(yǎng)基,甚至吸管什么的都換過了,但是就是不行,是怎么回事?
答:(1)兩周后的培養(yǎng)液應(yīng)補(bǔ)加谷氨酰胺,或者重新配液,轉(zhuǎn)染時應(yīng)不含抗生素。
(2)確認(rèn)操作方法和環(huán)境,建議檢查一下。
(3)Lipofectamine2000,脂質(zhì)體的毒性很大,如果有質(zhì)粒參與對細(xì)胞損傷更大,如果Lipofectamine2000在常溫放置過,對細(xì)胞更大,假期冰箱是否斷過電。
(4)培養(yǎng)箱的溫度、c02濃度,濕度。
二十、*培養(yǎng)液的相關(guān)定義。
問:“*培養(yǎng)液一詞”,是指加了HyClone胎牛血清的培養(yǎng)液嗎?我在做含藥血清的實(shí)驗(yàn),涉及到血清添加量的問題。所以想弄明白文中所指的“*培養(yǎng)液”是否是含藥血清。
答:原液是指配置后過濾除菌。不*培養(yǎng)液是指不含有血清的原液,其他成分已補(bǔ)充。*培養(yǎng)液是指不*培養(yǎng)液加入血清后稱*培養(yǎng)液。
二十一、血清相關(guān)知識總結(jié)。
使用HyClone胎牛血清的注意事項(xiàng):
血清是細(xì)胞培養(yǎng)中重要的元素之一。下面是實(shí)驗(yàn)室里常會遇到的問題,僅供大家參考:
1、保存血清的方法:
建議Hyclone北美血清SH30071.03應(yīng)保存在-5℃ 至 -2O ℃ 。然而,若存放于 4 ℃ 時,請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶,建議您無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。
2、如何解凍HyClone胎牛血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損:
建議您將Hyclone胎牛血清北美從冷凍箱取出后,先置于2~8℃ 冰箱使之溶解,然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是,溶解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。
3、HyClone胎牛血清南美解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該如何處理:
血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,但普的原因是由于Hyclone血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血渭解凍后,也會存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質(zhì)量。
若您欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因?yàn)樗赡軙枞倪^濾膜。
4、何謂熱滅活:
一般是以 56℃ , 30 分鐘來處理已解凍的血清,因?yàn)榇思訜岵襟E,可以使補(bǔ)體去活化,而補(bǔ)體所參與的反應(yīng)有 : 溶細(xì)胞活性,平滑肌的收縮,肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放,增強(qiáng)吞噬作用,淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的趨化和激活。
5、關(guān)于HyClone胎牛血清的滅活:
有必要做熱滅活嗎?
實(shí)驗(yàn)顯示,經(jīng)過正確處理的熱滅活Hyclone北美血清SH30071.03,對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的Hyclone血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn),或*沒有任何作用,甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,而造成細(xì)胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒立顯微鏡下觀察,像是“小黑點(diǎn)”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在 37℃ 環(huán)境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。
因此我們建議您,若非必須,您可以不需要做熱處理這一步。如此一來,不但節(jié)省您寶貴的時間,更確保您血清的質(zhì)量!
6、HyClone胎牛血清相關(guān)知識:
如何避免沉淀物的產(chǎn)生?
我們建議您在使用血清的時候,注意下列的操作 :
(1)解凍Hyclone南美血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-2O℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。
(2)解凍海克隆胎牛血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
(3)請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。
(4)HyClone胎牛血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
(5)若必須做HyClone胎牛血清的熱滅活,請遵守56℃,30 分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。