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血清瓶與帶溫度計的對照瓶一齊放入水浴箱中，待溫度計所示溫度上升至56℃時， 定時30分鐘。
⑤大瓶血清滅活后，進行分裝。
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分裝后，抽樣做無菌試驗，－20～－70℃保存。
為什么要熱滅活胎牛血清？
加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究，培養ES細胞，昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦試用熱滅活胎牛血清。
但是，其實，有必要做熱滅活嗎？實驗顯示，經過正確處理的熱滅活胎牛血清，對大多數細胞而言是不需要的。經此處理過的胎牛血清對細胞的生長只有微小的促進，或*沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了胎牛血清的質量，造成細胞生長速率降低。而經過熱處理的胎牛血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是小黑點？常常會讓研究者誤以為是胎牛血清遭受污染，而把胎牛血清放在37℃環境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。
