BI胎牛血清組份的復(fù)雜性及作用機理的關(guān)聯(lián)性,使得人工無血清培養(yǎng)基添加物想要模擬胎牛血清組份的作用就難上加難了。但隨著細胞生物學(xué)及發(fā)酵制藥工業(yè)的發(fā)展,成本及潔凈程度的要求下,勢必會有新的人工替代試劑出現(xiàn),而這需要我們科研人員的共同努力。
BI胎牛血清使用中遇到的常見問題總結(jié):
問:加到培養(yǎng)基中的BI牛血清必須滅活嗎?
答:不是必須的,看做什么實驗了。
問:BI胎牛血清(Bioind胎牛血清)滅活是56℃ 30分鐘嗎?
答:如果用于培養(yǎng)大多數(shù)的腫瘤細胞,血清一般是不需要滅活的,這樣可以有效保存血清中的生長因子。 但是如果用于培養(yǎng)一些表面具有補體受體的細胞,如內(nèi)皮細胞,血清是需要滅活,一般是56℃,30min。
問:我要做滋養(yǎng)細胞培養(yǎng),胎牛血清要滅活嗎?
答:進口的一般都已滅活,國產(chǎn)的不一定,還是滅活一下再用較安全。
問:我用病毒上清轉(zhuǎn)染細胞,培養(yǎng)用的血清需要滅活嗎?因為血清中可能有些補體和抗體,是不是會影 響轉(zhuǎn)染?我想未滅活的血清中含些抗體補體可能會和病毒相結(jié)合,影響轉(zhuǎn)染,正確嗎?細胞是單核細胞白血病細胞, 病毒是病毒包裝細胞PT67收集的病毒上清。為什么要用無血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時,目的是什么?
答:血清一定要滅活,可以先用無血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時以后再加血清。避免雜蛋白對病毒和宿主 結(jié)合過程的干擾,一般是2-6小時,根據(jù)細胞的狀態(tài)決定。血清不一定需要滅活,滅活的目的是將血清中的補體滅活 !這要根據(jù)實際情況而定,如果沒有把握那就滅活吧,也不麻煩56度半個小時。
問:(1)我買的是BI胎牛血清,要滅活嗎?有些說法是需要,有些說直接解凍后就可以加入到培 養(yǎng)基中;我配制胰蛋白酶液,用的是D-PBS,有關(guān)系嗎?
答:關(guān)于BI胎牛血清的熱滅活,是很多人感興趣也存在一定爭議的話題。大多數(shù)實驗室將血清的熱滅活還是作為 常規(guī)來執(zhí)行,因為有兩個作用,第一是滅活補體,第二是滅活血清中可能存在的支原體。但是實驗者并沒有考慮熱處 理對血清中的生長因子 氨基酸等成分帶來的負面影響。