蛋白酶K是一種從白色念 珠菌分離出來的強力蛋白溶解酶,具有很高 的比活性,是DNA提取的關鍵試劑。該酶 在較廣的pH范圍(4?12.5)內及高溫 (50?70°C)均有活性,用于質粒或基因組 DNA、RNA的分離。在DNA提取中,主 要作用是酶解與核酸結合的組蛋白,使 DNA游離在溶液中,隨后用不同方法進行 抽提,除去雜質,收集DNA。EDTA等螯 合劑或SDS等去垢劑均不能使之失活。蛋 白酶K貯存液一般為10mg/ml或20mg/ml。 貯存于一20°C。蛋白酶K溶液為無色透明, 如出現沉淀就不能再使用。
作用
值得注意的是,蛋白酶K在原位雜交技術中通常用于雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質的作用,以增加探針與靶核酸結合的機會,提高雜交信號.但蛋白酶K的濃度過高、消化時間過長或孵育溫度過高時,都會對細胞的結構有一定的破壞,導致組織切片的脫落,細胞核的消失,從而影響雜交結果.EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用,解決上述出現的問題,并能達到理想的染色效果。
應用
蛋白酶K已廣泛應用在皮革、毛皮、絲綢、醫藥、食品、釀造等方面。皮革工業的脫毛和軟化已大量利用蛋白酶,既節省時間,又改善勞動衛生條件。蛋白酶還可用于蠶絲脫膠、肉類嫩化、酒類澄清。臨床上可作藥用,如用胃蛋白酶治療消化不良,用酸性蛋白酶治療支氣管炎,用彈性蛋白酶治療脈管炎以及用胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶對外科化膿性創口的凈化及胸腔間漿膜粘連的治療。加酶洗衣粉是洗滌劑中的新產品,含堿性蛋白酶,能去除衣物上的血.漬和蛋白污物,但使用時注意不要接觸皮膚,以免損傷皮膚表面的蛋白質,引起皮疹、濕疹等過敏現象。