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用溴甲酚紫法測定白蛋白含量的流程
  • 發布日期:2021-12-21      瀏覽次數:1230
    • 實驗原理

      溴甲酚紫法(BCP法)是一種測定白蛋白含量的方法。實驗原理為在pH5.2的緩沖液中,有Brij-35存在時,溴甲酚紫(bromocresol puple,BCP)可與白蛋白結合形成綠色復合物,在波長603nm處的吸光度與白蛋白濃度成正比例,與同樣處理的白蛋白標準比較,可求得血清中白蛋白含量。

      實驗原理

      在pH5.2的緩沖液中,有Brij-35存在時,溴甲酚紫(bromocresol puple,BCP)可與白蛋白結合形成綠色復合物,在波長603nm處的吸光度與白蛋白濃度成正比例,與同樣處理的白蛋白標準比較,可求得血清中白蛋白含量。

      試劑與器材

      1.250g/LBrij-35溶液見BCG法

      2.50mmol/L BCP貯存液稱取BCP 675mg溶于無水乙醇15ml中,當溶液變為橙色透明時,用無水乙醇稀釋至25ml。置4C冰箱保存至少可穩定3個月。

      3.2.5mol/L醋酸溶液量取冰醋酸150ml用蒸餾水稀釋至1L。

      4.BCP試劑稱取無水醋酸鈉6.03g(或三結晶水的醋酸鈉10g)溶于蒸餾水950ml中,加Brij-35液1ml,BCP貯存液1ml,用2.5mol/L醋酸溶液調pH至5.20+0.03(約需10ml),加蒸餾水至1L(BCP貯存液也可在調好pH后再加)。在室溫可穩定一周。

      5.0.154mol/L NaCl溶液稱取NaCl9g用蒸餾水溶解至1L。

      6.白蛋白標準液采用人白蛋白或定值,切不可用動物血清蛋白。

      操作步驟

      1.生化自動分析儀分析法參數見有關儀器操作說明書。

      2.手工操作法。

      混勻,1min后在波長603nm處比色,用空白管調零,讀取測定管和標準管吸光度。

      評價

      本法反應最適pH為5.20,接近α-和β-球蛋白的等電點,抑制了這兩種球蛋白與BCP的非特異性反應,故對測定白蛋白具有高特異性。此外,BCP與白蛋白的反應為即時*反應,不受時間和溫度變化的影響,呈色后穩定1h以上。本法線性范圍5-50g/L,在10-40g呈線性良好,50g/l時稍偏低;CV為0.45%;回收率99.3%~102%,平均回收率100.5%.本法兼有BCG法的主要優點,克服了BCG法的多數缺點,與火箭電泳法結果相一致,成為測定血清白蛋白燃料結合法中較好的一個方法。BCP與牛,豬(新鮮或凍干)血清反應性僅為BCG反應的1/3,不適用于動物血清白蛋白作質量控制,機制尚待闡明。


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