制備及其進(jìn)展
方法：提取基因組DNA作為模板，通過PCR擴(kuò)增得到酶基因，經(jīng)DNA體外重組構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒。結(jié)果：實(shí)現(xiàn)在大腸桿菌中的表達(dá)，并成功轉(zhuǎn)化黃原膠菌株。轉(zhuǎn)化過程提示黃原膠菌株可能具有某些特殊性。
建立了一種經(jīng)濟(jì)、簡便的一步酶法，大量合成尿苷二磷酸葡萄糖。在酶法合成中，用UTP代替ATP，并建立了UTP的再生系統(tǒng)；建立了反復(fù)補(bǔ)加法和酶回收法，使酶的利用率達(dá)到最高。
黃原膠是由野油菜黃單胞菌（Xanthomonascampestris）分泌的胞外雜多糖，是目前產(chǎn)量最高的微生物多糖之一，具有假塑性、溫度和pH穩(wěn)定性，以及與鹽類良好的相容性，廣泛應(yīng)用于食品、石油、化工、醫(yī)藥等領(lǐng)域。國外關(guān)于黃原膠的研究從20世紀(jì)60年代起步，國內(nèi)自70年代開始，包括菌種選育、發(fā)酵工藝研究、黃原膠理化性質(zhì)探討及其免疫學(xué)活性分析等。經(jīng)查閱資料發(fā)現(xiàn)，在黃原膠的合成過程中，含糖的底物需要尿苷二磷酸葡萄糖脫氫酶（uridinediphosphateglucosedehydrogenase，UDPGD）的催化才能生成葡萄糖醛酸，而后者是黃原膠生物合成的前體之一。故此，我們設(shè)想以黃原膠菌株基因組DNA為模板，通過合成引物、擴(kuò)增、克隆得到UDPGD基因，在實(shí)現(xiàn)大腸桿菌的表達(dá)后，再轉(zhuǎn)入原黃原膠菌株，希望UDPGD酶量的增加能夠帶來黃原膠產(chǎn)量增加的正效應(yīng)。文獻(xiàn)報(bào)道UDPGD基因全長1338bp，285bp處含PstⅠ切點(diǎn)，740bp處含BamHⅠ切點(diǎn)，編碼445個(gè)氨基酸，蛋白相對分子質(zhì)量48432。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)，我們對UDPGD的研究工作取得了初步結(jié)果。
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