細(xì)胞裂解液各成分的作用:
1、第一種50mmol/L Tris-HCl是緩沖液,保證細(xì)胞裂解時(shí)PH值也能穩(wěn)定,Tris是一種有機(jī)堿。
2、第二種1.0 mmol/L EDTA是一種金屬螯合劑。
3、第三種150 mmol/L NaCl是等滲體系電解質(zhì),用于協(xié)調(diào)細(xì)胞膜內(nèi)外離子平衡。
4、第四種0.1% SDS是十二烷基硫酸鈉,是一種表面活性劑和還原劑,有增溶作用。
細(xì)胞裂解及方法簡(jiǎn)介:
細(xì)胞裂解是改變細(xì)胞通透性和活性的重要實(shí)驗(yàn)方法。主要分為化學(xué)法和機(jī)械法,前者比較溫和,后者雖然產(chǎn)量高,但反應(yīng)更劇烈,很有可能造成細(xì)胞中的DNA斷裂。
裂解方法包括化學(xué)裂解、酶裂解和機(jī)械裂解。化學(xué)裂解和酶裂解通常是比較溫和的方法,通常會(huì)很少使DNA 斷裂。這兩種方法(包括SDS 和溶菌酶處理等)提取純化DNA中常用的方法。
機(jī)械裂解可以更均一的裂解細(xì)胞,同化學(xué)裂解相比,機(jī)械處理具有更高的裂解效率和更低的選擇性。機(jī)械處理可以更劇烈和全面的裂解細(xì)胞,但也會(huì)造成DNA 的斷裂。